Is cuid riachtanach de mhicreascóp fluaraiseachta é scagaire fluaraiseachta.Tá trí scagairí bunúsacha ag gnáthchóras: scagaire excitation, scagaire astaithe agus scáthán déchroic.Déantar iad a phacáistiú go coitianta i gciúb ionas go gcuirtear an grúpa isteach sa mhicreascóp le chéile.
Conas a oibríonn scagaire fluaraiseachta?
Scagaire Excitation
Tarchuireann scagairí excitation solas de thonnfhad ar leith agus cuireann siad bac ar thonnfhaid eile.Is féidir iad a úsáid chun dathanna éagsúla a tháirgeadh tríd an scagaire a thiúnadh chun gan ach dath amháin a cheadú.Tagann na scagairí excitation in dhá phríomhchineál - scagairí pas fada agus scagairí pas banna.De ghnáth is scagaire banda pas é an exciter nach dtéann ach na tonnfhaid a ghlacann an fluaraiseacht, rud a íoslaghdaíonn excitation foinsí eile fluaraiseachta agus a chuireann bac ar sholas excitation sa bhanda astaíochta fluaraiseachta.Mar atá léirithe ag an líne gorm san fhigiúr, is é BP 460-495, rud a chiallaíonn nach féidir leis ach pas a fháil tríd an bhfluaraiseacht 460-495nm.
Cuirtear é laistigh den chosán soilsithe de mhicreascóp fluaraiseachta agus scagtar amach gach tonnfhad den fhoinse solais ach amháin i raon excitation an fhluaraiféil.Ordaíonn tarchur íosta an scagaire gile agus brilliance na n-íomhánna.Moltar tarchur 40% ar a laghad d'aon scagaire excitation ionas go mbeidh an tarchur go hidéalach >85%.Ba cheart go mbeadh bandaleithead an scagaire excitation go hiomlán laistigh den raon excitation fluorophore ionas go mbeidh tonnfhad lár (CWL) an scagaire chomh gar agus is féidir do thonnfhad buaic excitation an fluorophore.Is é an dlús optúil scagaire excitation (OD) dictates an dorchadas íomhá cúlra;Is tomhas é OD ar cé chomh maith agus a bhlocálann scagaire na tonnfhaid lasmuigh den raon tarchurtha nó den bhandaleithead.Moltar OD ar a laghad de 3.0 ach tá OD de 6.0 nó níos mó oiriúnach.
Scagaire Astuithe
Freastalaíonn scagairí astaíochtaí chun ligean don fhluaraiseacht inmhianaithe ón sampla teacht ar an brathadóir.Cuireann siad bac ar thonnfhaid níos giorra agus tá tarchur ard acu ar feadh tonnfhaid níos faide.Tá baint ag an gcineál scagaire freisin le líon, m.sh. BA510IF san fhigiúr (scagaire bacainn cur isteach), tagraíonn an t-ainmniú sin don tonnfhad ag 50% dá tharchur uasta.
Tá na moltaí céanna maidir le scagairí excitation fíor maidir le scagairí astaíochtaí: tarchur íosta, bandaleithead, OD, agus CWL.Soláthraíonn scagaire astaíochta leis an idéalach CWL, tarchur íosta, agus teaglaim OD na híomhánna is gile is féidir, leis an blocáil is doimhne agus is féidir, agus cinntíonn sé go n-aimsítear na comharthaí astaíochtaí is lú.
Scáthán Dichroic
Cuirtear an scáthán déchroic idir an scagaire excitation agus an scagaire astaithe ag uillinn 45 ° agus léiríonn sé an comhartha excitation i dtreo an fhluarafór agus an comhartha astaíochta á tharchur i dtreo an bhrathadóra.Tá trasdulta géara ag scagairí déchróiceacha idéalacha agus scoilteoirí léasa idir an t-uasmhéid machnaimh agus an tarchur uasta, le frithchaitheamh >95% do bhandaleithead an scagaire excitation agus tarchur >90% do bandaleithead an scagaire astaithe.Roghnaigh an scagaire a bhfuil an tonnfhad trasnaithe (λ) den fhluarafór san áireamh, chun solas fáin a íoslaghdú agus chun an cóimheas comhartha-to-torann íomhá fluaraiseacha a uasmhéadú.
Is é an scáthán déchroic san fhigiúr seo ná an DM505, a ainmnítear mar sin toisc gurb é 505 nanaiméadar an tonnfhad ag 50% den tarchur uasta don scáthán seo.Léiríonn an cuar tarchuir don scáthán seo tarchur ard os cionn 505 nm, titim ghéar sa tarchur ar an taobh clé de 505 nanaiméadar, agus frithchaiteacht uasta ar an taobh clé de 505 nanaiméadar ach fós d'fhéadfadh roinnt tarchur a bheith aige faoi bhun 505 nm.
Cad é an difríocht idir scagairí pas fada agus banda pas?
Is féidir scagairí fluaraiseachta a roinnt ina dhá chineál: pas fada (LP) agus pas banna (BP).
Tarchuireann scagairí pas fada tonnfhaid fada agus cuireann siad bac ar na cinn is giorra.Is é an tonnfhad gearrtha ar an luach ag 50% den tarchur buaic, agus gach tonnfhad os cionn an gearrtha-ar a tharchur ag na scagairí pas fada.Is minic a úsáidtear iad i scátháin déchróiceacha agus i scagairí astaíochtaí.Ba cheart scagairí longpass a úsáid nuair a éilíonn an feidhmchlár uas-bhailiúchán astaíochtaí agus nuair nach bhfuil idirdhealú speictreach inmhianaithe nó riachtanach, rud a bhíonn i gcoitinne i gcás tóireadóirí a ghineann speiceas astaithe aonair in eiseamail a bhfuil leibhéil ísle uathfhluaraiseachta cúlra acu.
Ní tharchuireann scagairí pas banna ach banna tonnfhad áirithe, agus cuireann siad bac ar dhaoine eile.Laghdaíonn siad crosstalk trí ligean don chuid is láidre den speictream astaíochta fluairaraiseachta amháin a tharchur, laghdaítear torann uathfhluaraiseachta agus mar sin feabhsaíonn siad an cóimheas comhartha-go-torann i samplaí uathfhluaraiseachta ardchúlra, nach féidir le scagairí pas fada a thairiscint.
Cé mhéad cineál tacair scagaire fluaraiseachta is féidir le BestScope a sholáthar?
I measc roinnt cineálacha scagairí coitianta tá scagairí gorm, glasa agus ultraivialait.Mar a léirítear sa tábla.
| Socraigh Scagaire | Scagaire Excitation | Scáthán Dichroic | Scagaire Bacainn | Faoi stiúir lampa Fad Tonn | Iarratas |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | ·FITC: Modh antashubstainte fluaraiseacha · Oráiste aigéadach: DNA, RNA ·Auramine: Bacillus tiúbair ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: Modh antashubstainte fluaraiseacha · Iaidíd phróipidiam: DNA ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Breathnóireacht uathfhluaraiseachta · DAPI: staining DNA ·Hoechest 332528, 33342: a úsáidtear le haghaidh staining Crómasóim |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Catecholamines · 5-hiodrocsa tryptamine ·Tetracycline: creatlach, fiacla |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | ·Có5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Tá tacair scagairí a úsáidtear i bhfáltais fhluaraiseachta deartha thart ar na mórthonnfhaid a úsáidtear in iarratais fhluaraiseachta, atá bunaithe ar na fluaraiféis is mó a úsáidtear.Ar an gcúis seo, tá siad ainmnithe freisin tar éis an fluorophore bhfuil siad beartaithe le haghaidh íomháithe, mar shampla ciúbanna scagaire DAPI (gorm), FITC (glas) nó TRITC (dearg).
| Socraigh Scagaire | Scagaire Excitation | Scáthán Dichroic | Scagaire Bacainn | Faoi stiúir lampa Fad Tonn |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450 nm |
| Texas Dearg | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Conas a roghnaíonn tú scagaire fluaraiseachta?
1. Is é prionsabal an scagaire fluaraiseachta a roghnú ná ligean don solas fluaraiseachta / astaithe dul tríd an deireadh íomháithe chomh fada agus is féidir, agus an solas excitation a bhlocáil go hiomlán ag an am céanna, ionas go bhfaighidh sé an cóimheas comhartha-go-torann is airde.Go háirithe maidir le excitation multiphoton agus micreascóp machnaimh inmheánach iomlán a chur i bhfeidhm, cuirfidh an torann lag isteach go mór ar an éifeacht íomháithe, agus mar sin tá an ceanglas maidir le cóimheas comhartha le torann níos airde.
2. Bheith eolach ar speictream excitation agus astaíochta an fhluarafór.Chun sraith scagaire fluaraiseachta a thógáil a ghineann íomhá ardchodarsnachta ardcháilíochta le cúlra dubh, ba cheart go n-éireodh le scagairí excitation agus astaíochtaí tarchur ard le ripple pasbhanna íosta thar na réigiúin a fhreagraíonn do bhuaiceanna nó astaíochtaí excitation an fhluaraiféil.
3. Smaoinigh ar marthanacht na scagairí fluaraiseachta.Caithfidh na scagairí seo a bheith neamh-thréscaoilteach d’fhoinsí solais déine a ghineann solas ultraivialait (UV) a d’fhéadfadh “dóite” a bheith mar thoradh air, go háirithe an scagaire exciter mar go bhfuil sé faoi réir déine iomlán na foinse soilsithe.
Na hÍomhánna Samplacha Fluaraiseacha Éagsúla
Bailítear agus eagraítear na hacmhainní ar an Idirlíon, agus ní úsáidtear iad ach le haghaidh foghlama agus cumarsáide.Má tá aon sárú ann, déan teagmháil linn le scriosadh.
Am postála: Dec-09-2022